醫用消毒機-醫療器械滅菌效果監測應在在滅菌處理后，存放有效期內進行無菌檢驗。無菌檢驗應在潔凈度為100級單向流空氣區域內進行，應嚴格遵守無菌操作，避免微生物污染。

一、準備1，洗脫液與培養基無菌性試驗:無菌試驗前3d，于需-厭養培養基與霉菌培養基內各接種1ml洗脫液，分別置30℃～35℃與20℃～25℃培養72h，應無菌生長。 2，陽性對照管菌液制備: ①在試驗前一天取金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通瓊脂斜面新鮮培養物，接種1環至需-厭氧培養基內，在30℃～35℃培養16h～18h后，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至10cfu/ml～100cfu/ml; ②取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厭氧菌培養基新鮮培養物1接種環種于相同培養基內，于30℃～35℃培養 18h～24h后，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至10cfu/ml～100cfu/ml; ③取白色念珠菌[CMCC（F）98001]真菌瓊脂培養基斜面新鮮培養物1接種環種于相同培養基內，于20℃～25℃培養 24h后，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至10cfu/ml～100cfu/ml。

二、取樣對縫合針、針頭、刀片等小件醫療器械直接取樣品各一件分別浸入6管需-厭氧培養管(其中一管作陽性對照)與4管霉菌培養管。培養基用量為15ml/管。對注射器5副，用5ml洗脫液中反復抽吸5次，混和后接種需-厭養菌培養管(共6管，其中1管作陽性對照)與霉菌培養管(共4管)。 接種量：1ml注射器為0.5ml，2ml注射器為1ml，5ml～10ml 注射器為2ml，20ml～50ml注射器為5ml,培養基用量：接種量2ml以下為15ml/管，5ml為40ml/管。對手術鉗、鑷子等大件醫療器械，取2件用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復涂抹采樣，將棉拭子投入5ml無菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需-厭氧培養管(共6管，其中1管作陽性對照)與霉菌培養基(共4管)。接種量為1ml/管, 培養基用量為15ml/管。

三、培養在待檢樣品的需-厭氧培養管中，接種預先準備的金黃色葡萄球菌陽性對照管1:1000稀釋1ml，將需-厭氧培養管以及陽性與陰性對照管均于30℃～35℃培養5d，霉菌培養管與陰性對照管于20℃～25℃培養7d，培養期間逐日檢查是否有菌生長，如加入供試品后培養基出現混濁或沉淀，經培養后不能從外觀上判斷時，可取培養液轉種入另一支相同的培養基中或斜面培養基上，培養48h～72h后，觀察是否再現混濁或在斜面上有無菌落生長，并在轉種的同時，取培養液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長。

四、結果判定陽性對照在24h內應有菌生長，陰性對照在培養期間應無菌生長，如需-厭氧菌及霉菌培養管內均為澄清或雖顯混濁但經證明并非有菌生長，判為滅菌合格；如需-厭氧菌及霉菌培養管中任何1管顯混濁并證實有菌生長，應重新取樣，分別同法復試2次，除陽性對照外，其他各管均不得有菌生長，否則判為滅菌不合格。五、注意事項1，送檢時間不得超過6h，若樣品保存于0℃～4℃，則不得超過24h。2，被采樣本表面積＜100cm2取全部表面；被采樣本表面積≥100cm2，取100cm2。 3，若消毒因子為化學消毒劑,采樣液中應加入相應中和劑。

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